背景
天水圍北在1990年代後期開始發展，多個屋苑在2000年後開始陸續入伙。運輸署在1999年配合天水圍北居民日後的出行需要，邀請各巴士公司就一組天水圍北巴士路線進行投標。最終1999年11月，九巴投得天水圍北的路線，其中一條是來往天水圍北至紅磡碼頭，途經西九龍公路直往佐敦及尖沙咀的路線。
最終九巴大幅修改路線，路線編號為265B，不途經西九龍走廊，九龍區總站改為旺角柏景灣。天水圍區由天恆邨開出，經天富苑、天頌苑、翠湖居、嘉湖北及天慈邨，後駛入元朗公路、青朗公路、大欖隧道後落屯門公路，再途經荃灣路及葵涌道往市區。九龍方面，往旺角方向途經長沙灣道、欽州街、荔枝角道、上海街、亞皆老街、櫻桃街及海泓道，往天水圍方向則途經海泓道、大角咀道、櫻桃街、新填地街、彌敦道及長沙灣道。此路線在天水圍可以補充69X線在天水圍去不到的地區。
最終路線在2001年3月18日開辦，但初時因天恆總站未能啟用，故暫時以天富為總站，直至2001年4月1日才正式以天恆為總站，並來回方向在奧運站加設分站。路線一直大致不變。
用車演變史
根據運輸署的標書內容，天水圍北的投標路線必須以特低地台巴士行走。當然，巴士公司間中會因車務調動而派出非特低地台巴士行走。265B線開辦長曾長期以Neoplan Centroliner (AP)行走，最初是J牌的歐盟二期版本，直至2008年5月，政府收緊行走彌敦道的特低地台巴士要求，必須是歐盟三期或以上，265B線曾一度轉用K牌的歐盟三期版本，但最終因車長投訴歐盟三期版本重軚，故換回歐盟二期版本。
踏入2010年代，265B線開始改用英國車行走，先是歐盟三期版本的富豪超級奧林比安(3ASV)，其高載客量(132人)可以增加載客能力。
政府在2016年收緊彌敦道旺角段的要求，並在近始創中心一段加設低排放區，所有行經該處的專營巴士必須達到歐盟四期或以上排放標準，並在2020再收緊至歐盟五期。由於265B線往天恆方向行經上述路段，故需要更換用車，改以ADL Enviro 500 MMC型(ATENU)以及富豪B9TL型(AVBWU)作為掛牌車。另外，九巴在2015年引入MAN A95樣辦車(ANME1/TP1095)，投入服務初期曾在265B掛牌行走，但不足一年便調到屯門區。
九巴在2019年引入富豪B8L型(V6B)並投入服務，最初265B線曾使用此款作掛牌，但短時間內已改回使用ADL Enviro 500 MMC型巴士。直至本文發出當日，掛牌車全是城市脈搏版本的紅色ADL Enviro 500 MMC型巴士。
天恆特別安排
265B線在天恆總站位於最旁邊，靠近天澤商場，而且是雙車坑設計，故乘客及巴士等候空間較大。同時，港鐵巴士K76線在早上繁忙時間在天恆總站等待候的乘客，以及巴士數目太多，而K76線使用總站中間位置，而且是單車坑設計，故較易使巴士和乘客構成危險。
在2010年代開始，九巴和港鐵在星期一至五早上6時至9時實行特別安排，265B線和K76線對調候車位置，讓K76線乘客和巴士有較多空間等候。
加設天水圍雙向分段收費，方便天水圍南北區內通行
九巴在2020年8月8日起，推行屯元天雙向分段收費計劃，最初並不包括265B線。於2021年4月，九巴在上調各路線車費的同時，在屯門及天水圍擴展計劃適用範圍，265B線為其中一條因擴展計劃而受惠的路線。
乘客利用八達通乘搭往旺角的265B線的巴士，上車時會先扣除全程車費，並在天水圍內指定車站下車，在車站的回贈機再次確認八達通，可享$4.8的分段收費，即會回贈多付的車費。
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